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    哮喘模型

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    产品产地: 中国大陆
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    哮喘模型,小鼠明矾OVA致哮喘模型
    哮喘是一种由多种炎症细胞及炎症介质参与的气道慢性炎症性疾病,气道炎症、平滑肌功能紊乱和气道重塑是哮喘的主要病理改变,发病率呈逐年增加趋势。
     

    哮喘模型

    小鼠明矾OVA致哮喘模型
      哮喘是一种由多种炎症细胞及炎症介质参与的气道慢性炎症性疾病,气道炎症、平滑肌功能紊乱和气道重塑是哮喘的主要病理改变,发病率呈逐年增加趋势。
      现已发现有多种细胞因子参与哮喘发病的调控,其中关于Th1/Th2类细胞因子失衡学说为目前的研究热点。IFN-γ、IL-4分别是Th2、Th2细胞的特征性细胞因子,在哮喘的发病机制中,IFN-γ和IL-4的不平衡是引起IgE产生异常和哮喘发病的重要因素,调节Th1细胞因子活性或抑制Th2细胞因子已成为哮喘防治探讨的新热点。*新的研究发现在抗原刺激后气道上皮可以使前炎性细胞因子 IL-25 表达增加,促使 IL-4 及 IL-13等 Th2 细胞因子过量表达。

    1.实验动物
      SPF级Balb/C小鼠,雄性,周龄为4w~6w,体重为20g~22g。

    2.实验分组
      实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组,每组15只动物。

    3.主要试剂
      卵蛋白(OVA)
      明矾

    4.实验周期
      6W

    5.建模方法
      5.1 明矾致敏佐剂:10%明矾溶液(溶于双蒸水)2ml与500ug/ml OVA(溶于PBS)2ml等量混合后,用NAOH调PH值为6.5,室温孵育60min,750r/min,离心5min,去掉上清液,重溶于2ml PBS。致敏时每只小鼠腹腔注射200ul,其中含2mg明矾和100ug OVA。
      5.2 致敏:小鼠分别于第0、14天时腹腔注射明矾致敏佐剂0.2ml,对照组注射相同剂量的PBS溶液,正常饮食饲养。
      5.3 激发:雾化吸入,第21天时小鼠放入有机玻璃箱,5% OVA雾化吸入。每天30min,共7d,*后一次致敏后24h内检测。以小鼠出现烦躁不安、呼吸急促、腹肌痉挛等阳性反应作为造模成功的标准。对照组采用PBS雾化吸入,其他操作均相同。
      5.4 末次激发24h麻醉小鼠,摘眼球取血,室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清,放入-80冰箱冻存。取左肺组织于4%多聚甲醛溶液中固定用于病理染色;右肺组织液氮冷冻,-80℃保存用于分生标本。

    6.模型评估
      6.1 一般观察 哮喘模型组大鼠在激发开始后出现打喷嚏、点头呼吸、呼吸急促、哮鸣音、腹肌收缩、烦躁等典型哮喘发作症状,并且后期观察中发现饮食减少、毛色无光泽、行动迟缓及体重逐渐下降。
      6.2 支气管肺泡灌洗液(BALF)的收集*后1次激发24 h后(第28天)将各组小鼠颈椎脱臼处死,无菌条件下分离气管,结扎左主支气管后,剪开右主支气管插入气管导管并固定,无菌生理盐水灌洗3次, 1mL/次,收集的BALF于4℃1200 r.min-1离心5 min,弃去上清液, PBS重悬细胞沉淀并涂片,进行细胞分类。
      6.3 肺组织病理学
      取左肺组织用4%多聚甲醛固定、脱水、石蜡包埋, 4μm切片,HE染色。正常组支气管无明显炎症细胞浸润,结构正常。哮喘组可见弥漫性细小支气管和血管周围炎性细胞浸润,其中嗜酸细胞显著增多。气道上皮有不同程度脱落,支气管豁膜上皮杯状细胞增生,管腔内可见豁液栓及炎性渗出,支气管平滑肌显著增厚,血管周围水肿。
      6.4 细胞因子的检测
      模型组血清中IL-25、IL-4的含量显著高于对照组。采用elisa试剂盒检测血清中IL-25、IL-4的含量。

     

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    标签:哮喘模型   
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