克隆形成实验 实验介绍 : 当单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所组成的细胞群体,成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞,大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。 实验方法: 平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验 (a) 平板集落形成实验:本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞 (b) 软琼脂集落形成实验:本法适用于非锚着依赖性生长的细胞,如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。 注意事项: (a) 琼脂对热和酸不稳定,若反复加热,容易降解而产生毒性,且硬度下降。因此高压灭菌后应进行分装; (b) 细胞在进行克隆形成实验时要求有95%以上的分散度,否则结果的准确度会受到很大影响; (c) 软琼脂与细胞混合时温度不能超过40℃,否则将会烫伤/死细胞; (d) 接种时细胞密度适度,不可过高。 细胞在低密度、非贴壁状态条件下培养,生存率明显下降,永生细胞系/株克隆形成率可达到10%以上,但初代培养细胞和有限传代细胞系克隆形成率仅为0.5%-5%,甚至无法形成单个克隆。因此,为了提高克隆形成率,有时需要在培养基中添加胰岛素、地塞米松等促克隆形成物质。 细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数,但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同,细胞克隆形成率差别也很大,一般初代培养细胞克隆形成率弱,传代细胞系强;二倍体细胞克隆形成率弱,转化细胞系强;正常细胞克隆形成率弱,肿瘤细胞强。并且克隆形成率与接种密度有一定关系,做克隆形成率测定时,接种细胞一定要分散成单细胞悬液,直接接种在碟皿中,持续一周,随时检查,到细胞形成克隆时终止培养。 服务流程: 1、 讨论分析实验方案 2、 确定服务内容 3、 签订服务合同 4、 进行实验,定期向客户反馈 5、 整理实验报告 6、 完成合同内容 7、 后续实验服务,进一步合作 收费标准/服务周期/提供结果: 欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。 【本公司合作项目】 慢病毒,腺病毒,RNAi类,分子生物实验,病理实验,免疫学实验,细胞实验,动物实验,蛋白组学实验等,能够进行药效学评价、毒理学评价、细胞药筛、动物建模、病理检测、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析服务! 详情请咨询: 【公司网站】www.mxbio.cn 【公司电话】021-54581185 【技术咨询】13916322264 【公司邮箱】shmxbio@163.com 【公司地址】上海市闵行区沧源路1200号2218室 更新时间:2024/4/10 8:35:03 标签:克隆形成实验 |