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    Brdu细胞增殖检测

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    产品产地: 中国大陆
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    Brdu细胞增殖检测
    BrdU作为一种胸腺嘧啶核苷的类似物(其化学结构特点是胸腺嘧啶的碱基嘧啶环上与5位C原子连接的甲基被溴代替),像胸腺嘧啶核苷一样可掺入到细胞合成的DNA中。当细胞处于DNA合成期而同时又有BrdU存在时, 就会有BrdU掺入新合成的DNA中,只要细胞不消亡,这种BrdU就在胞核的DNA中长期存留。
     

    Brdu细胞增殖检测

    BrdU作为一种胸腺嘧啶核苷的类似物(其化学结构特点是胸腺嘧啶的碱基嘧啶环上与5位C原子连接的甲基被溴代替),像胸腺嘧啶核苷一样可掺入到细胞合成的DNA中。当细胞处于DNA合成期而同时又有BrdU存在时, 就会有BrdU掺入新合成的DNA中,只要细胞不消亡,这种BrdU就在胞核的DNA中长期存留。掺入到DNA的BrdU可通过抗BrdU单克隆抗体在组织切片或细胞爬片上显示。该方法能对细胞增值进行迅速而稳定的测量, 而且标记BrdU的细胞只要不受到紫外线照射,对细胞本身没有功能损害。
     
    操作步骤
    1. 细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片),培养1天,用含0.4%FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0 期。
    2. 终止细胞培养前,加入BrdU(终浓度为30μg/L),37℃,孵育40min。
    3. 弃培养液,玻片用PBS洗涤3次。
    4. 甲醇/醋酸固定10min。
    5. 经固定的玻片空气干燥,0.3%H2 O2 -甲醇30min灭活内源性氧化酶。
    6. 5%正常兔血清封闭。
    7. 甲酰胺100℃,5min变性核酸。
    8. 冰浴冷却后PBS洗涤,加1抗即抗小鼠BrdU单抗(工作浓度1:50),阴性对照加PBS或血清。
    9. 按ABC法进行检测,苏木素或伊红衬染,在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数,计算标记指数(LI)。
    客户提供
    1. 提供新鲜的肝素或者EDTA抗凝的外周血;
    2. 提供新鲜的培养细胞,提供新鲜组织,需要实验室制备成单细胞悬液。
     
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    【本公司合作项目】
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